一、多肽合成儀技術(shù)原理：固相多肽合成(SPPS)的核心邏輯
多肽合成儀基于Bruce Merrifield于1963年提出的固相多肽合成法(SPPS)，其核心是通過將氨基酸C端固定在樹脂載體上，逐次添加N端保護(hù)的氨基酸完成肽鏈延伸。具體步驟如下：
樹脂預(yù)處理
選擇合適的固相載體(如Rink Amide Resin)，用二氯甲烷(DCM)溶脹樹脂，去除雜質(zhì)后抽干備用。
脫保護(hù)
使用堿性溶劑(如20%六氫吡啶/DMF溶液)去除前一個(gè)氨基酸的Fmoc保護(hù)基團(tuán)，使氨基暴露以參與下一步反應(yīng)。
偶聯(lián)反應(yīng)
將新的氨基酸(N端保護(hù))與活化試劑(如HBTU、DCC)混合，形成活性酯后投入反應(yīng)器，與脫保護(hù)的氨基結(jié)合形成肽鍵。
洗滌與純化
每步反應(yīng)后用DMF、甲醇等溶劑洗滌，去除未反應(yīng)的原料和副產(chǎn)物，減少雜質(zhì)積累。
裂解與釋放
合成完成后，用三氟乙酸(TFA)等裂解液將多肽從樹脂上切下，經(jīng)乙醚沉淀、離心、干燥得到粗肽。
技術(shù)優(yōu)勢：
自動(dòng)化操作：減少人工誤差，提高重復(fù)性。
高效純化：固相載體便于分離，避免液相合成中復(fù)雜的中間體純化步驟。
規(guī)模化生產(chǎn)：支持毫克級至克級合成，滿足藥物研發(fā)需求。
二、關(guān)鍵組件與功能：精密控制的硬件基礎(chǔ)
多肽合成儀的硬件設(shè)計(jì)直接影響合成效率與產(chǎn)物純度，核心組件包括：
反應(yīng)器
材質(zhì)：玻璃或聚丙烯，耐化學(xué)腐蝕。
容量：覆蓋30μmol(小規(guī)模研究)至3g樹脂(工業(yè)化生產(chǎn))。
多通道設(shè)計(jì)：支持2/4/6通道并行合成，提升高通量能力。
溶劑輸送系統(tǒng)
自動(dòng)輸送模塊：精確控制DMF、DCM等溶劑的流速(誤差<1%)。
惰性氣體保護(hù)：通過氮?dú)?氬氣隔絕氧氣，防止氨基酸氧化。
溫控模塊
精度：±0.5℃，減少消旋化副反應(yīng)。
范圍：室溫至60℃，適配不同保護(hù)基團(tuán)的脫除條件。
檢測與控制系統(tǒng)
UV監(jiān)測：實(shí)時(shí)檢測反應(yīng)液吸光度，判斷脫保護(hù)/偶聯(lián)終點(diǎn)。
質(zhì)譜分析：可選配在線質(zhì)譜，確認(rèn)每步產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
三、多肽合成儀操作流程：從試劑準(zhǔn)備到產(chǎn)物純化的全鏈條
設(shè)備校準(zhǔn)與準(zhǔn)備
檢查溶劑儲(chǔ)液瓶與氣體管道連接，確保無泄漏。
校準(zhǔn)溫度、壓力、取液針等參數(shù)，運(yùn)行自檢程序。
試劑與材料準(zhǔn)備
稱量氨基酸、活化試劑(如HBTU)、溶劑(DMF、DCM)。
將樹脂加入反應(yīng)器，用DCM溶脹后抽干。
合成程序設(shè)置
輸入多肽序列，設(shè)定反應(yīng)條件(溫度、時(shí)間、溶劑比例)。
示例：Fmoc脫保護(hù)(20%哌啶/DMF，5分鐘×2次)；偶聯(lián)反應(yīng)(3倍過量氨基酸，1小時(shí))。
自動(dòng)化合成
啟動(dòng)程序，儀器自動(dòng)完成脫保護(hù)、偶聯(lián)、洗滌循環(huán)。
監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，如UV吸光度穩(wěn)定后進(jìn)入下一步。
產(chǎn)物裂解與純化
加入裂解液(TFA/水/三異丙基硅烷=95:2.5:2.5)，室溫?cái)嚢?小時(shí)。
過濾除去樹脂，濃縮裂解液后用乙醚沉淀粗肽。
通過高效液相色譜(HPLC)純化，得到高純度多肽(>95%)。
